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荧光显微镜下的细胞红绿灯
发布时间:2022-08-25

荧光显微镜下的细胞红绿灯

近日,“新国标红绿灯”、“新版红绿灯”话题引发热议,直冲各大平台热搜榜,很多人纷纷惊呼这设计是要搞出大量交通事故,幸好证实是虚惊一场,这种设计只会在少数情况下使用,不会推广。在细胞中,其实也存在运输系统和红绿灯,可以用荧光显微镜可视化观察,相关研究还曾获2013年诺贝尔奖,比新版红绿灯有意思,一起来了解下吧!

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细胞中的“车辆”和“高速公路”

细胞内细胞器的定位、迁移和胞内物质运输,依赖于马达蛋白和微管(Microtubule,简称MT)的相互作用,前者相当于“车辆”,而后者相当于“高速公路”。2013年詹姆斯·罗斯曼、兰迪·谢克曼和托马斯·聚德霍夫3位科学家因发现细胞中囊泡转运机制,获得了2013年诺贝尔生理学或医学奖。



细胞中的高速与车辆.jpg

细胞中的车辆和高速公路①

细胞内细胞器的定位、迁移和胞内物质运输,依赖于马达蛋白和微管(Microtubule,简称MT)的相互作用,前者相当于“车辆”,而后者相当于“高速公路”。2013年詹姆斯·罗斯曼、兰迪·谢克曼和托马斯·聚德霍夫3位科学家因发现细胞中囊泡转运机制,获得了2013年诺贝尔生理学或医学奖。

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两种马达蛋白在微管上相向而行②

马达蛋白有非常多种,通常关注的有两种,动力蛋白Dynein和驱动蛋白Kinesin,两种“车辆”运动方向刚好相反,前者主要负责从细胞的周围到细胞的中心运载细胞器和囊泡等货物,后者主要负责从细胞的中心到细胞的中心运载货物,顺便会把前者带出来。



荧光显微镜如何看到细胞中的车辆和公路?


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荧光显微镜下的细胞微管(红)和动力蛋白(绿)②

动力蛋白、驱动蛋白和微管的相关研究通常在小鼠、果蝇等模式生物或培养细胞上进行,微管可以使用Tubulin红色荧光标记染色,动力蛋白和驱动蛋白一般利用GFP标记为绿色,由于观察目标非常小,因此一般建议使用MF43-N等研究级正置荧光显微镜,搭配高放大倍数、高数值孔径的60X油镜或100X油镜。


成像延时摄影.jpg

荧光成像延时摄影②

为了观察和记录动力蛋白/驱动蛋白随时间移动的情况,还需要用到类似MC50-S等高灵敏度的显微镜相机,进行延时摄影或视频录制,比如每300ms左右拍摄一张图片或抽取视频帧,然后多张图片叠加,即可分析出移动路径。




细胞交通中的红绿灯MAPs


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明美MC50-S相机下的神经元荧光成像

动力蛋白、驱动蛋白的运输运动,受微管相关蛋白MAPs(Microtubule-Associated Protein)调节,因此MAPs蛋白又被称为“细胞交通中的红绿灯”,利用荧光标记技术,可以实现神经元的MAPs清晰成像。


神经元成像绿.jpg

明美MC50-S相机下的荧光成像

在神经细胞领域,目前已经发现MAP2、tau和MAP1b等微管相关蛋白MAPs会影响动力蛋白、驱动蛋白,在小鼠活体实验中单独敲除单个MAP不一定导致问题,表明这些MAPs可能有互补关系,就像红绿灯坏掉其中一个,并不会让交通信号完全无法判断。



细胞红绿灯.jpg

MAP1B变异(绿)导致神经元退化(红)③

但基因突变等问题导致MAPs异常,就可能引发神经元退化等问题,比如MAP1B变异导致神经元退化、tau蛋白异常磷酸化导致阿兹海默症,这就像红绿灯异常亮起,红黄绿全亮,车辆就摸不着头脑该走还是该停了。



相关研究还在继续深入中


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荧光显微镜MF43-N

“细胞红绿灯”非常有意思,值得深入,相关研究还在继续进行中,因为需要活细胞成像,因此研究级荧光显微镜在其中依旧扮演着重要的角色,如果您有需要进行相关的研究,我们推荐使用明美MF43-N正置荧光显微镜,成像质量高,使用方便,近年也有多位老师使用这款显微镜完成了高质量论文的发布,您和惊艳的荧光成像效果,可能就只差一通电话和一场试用。

附录:
①Source:learn.genetics.utah.edu
②DOI:10.1242/jcs.115.7.1453 Source:PubMed
③DOI: 10.1523/JNEUROSCI.2757-14.2015 Source: PubMed


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